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400-999-2100
本試劑盒專為小鼠椎間盤纖維環(huán)細胞分離與培養(yǎng)設(shè)計，提供從組織消化到原代培養(yǎng)的全流程解決方案。通過優(yōu)化試劑配方與操作流程，可高效獲取高純度、高活力的纖維環(huán)細胞，適用于椎間盤退變機制研究、組織工程及再生醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域的體外模型構(gòu)建。
試劑盒包含以下核心組件，所有組件均標注規(guī)格（3Tests/10Tests）、儲存條件及有效期：
小鼠椎間盤纖維環(huán)細胞專用清洗液
規(guī)格：3Tests（250 mL）；10Tests（500 mL×2）
儲存條件：2-8℃
有效期：12個月
小鼠椎間盤纖維環(huán)細胞專用消化液
規(guī)格：3Tests（15 mL）；10Tests（50 mL）
儲存條件：-5~-20℃
有效期：12個月
小鼠椎間盤纖維環(huán)細胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基
規(guī)格：3Tests（50 mL）；10Tests（100 mL）
儲存條件：2-8℃
有效期：12個月
小鼠椎間盤纖維環(huán)細胞添加劑
規(guī)格：3Tests（10 mL）；10Tests（20 mL）
儲存條件：-5~-20℃
有效期：12個月
100 μm細胞濾網(wǎng)
規(guī)格：3Tests（3個）；10Tests（10個）
儲存條件：常溫
有效期：36個月
70 μm細胞濾網(wǎng)
規(guī)格：3Tests（3個）；10Tests（10個）
儲存條件：常溫
有效期：36個月
專用清洗液
含pH緩沖體系與蛋白酶抑制劑，有效去除血液與雜質(zhì)，維持細胞表面抗原完整性。
專用消化液
復(fù)合酶配方（含膠原酶與胰蛋白酶），精準降解細胞外基質(zhì)，最大限度保留細胞活性。
基礎(chǔ)培養(yǎng)基+添加劑
含胎牛血清、生長因子及抗氧化劑，支持纖維環(huán)細胞貼壁生長與增殖。
自備器材：
EP管架（2個）、手術(shù)器械（眼科剪×3、直鑷×1、彎鑷×2、顯微直鑷×1、顯微彎鑷×1、手術(shù)刀及刀片）
培養(yǎng)皿（6cm/10cm）、T25培養(yǎng)瓶、泡沫解剖板、離心管（2mL/15mL/50mL）
預(yù)處理建議：
正式實驗前使用1-2只正常小鼠進行解剖模擬訓(xùn)練，優(yōu)化操作速度與組織分離精度。
組織獲取與清洗
解剖取小鼠椎間盤組織，置于預(yù)冷的清洗液中漂洗3次（每次5分鐘），去除附著的肌肉與脂肪。
消化處理
將組織剪碎至1mm3大小，加入消化液（37℃孵育40-60分鐘），每10分鐘輕柔吹打一次。
過濾與離心
消化液經(jīng)100μm濾網(wǎng)過濾去除大塊殘渣，收集濾液；再經(jīng)70μm濾網(wǎng)過濾，得到單細胞懸液。
1000rpm離心5分鐘，棄上清，用基礎(chǔ)培養(yǎng)基重懸細胞。
培養(yǎng)與傳代
接種至T25培養(yǎng)瓶，添加含添加劑的培養(yǎng)基，置于37℃、5% CO?培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。每2-3天換液，待細胞融合度達80%時傳代。
無菌操作
試劑分裝后立即用封口膜密封，避免反復(fù)凍融；所有操作需在超凈工作臺完成。
消化控制
過度消化會損傷細胞膜，需通過顯微鏡觀察組織消化狀態(tài)（以大部分細胞分散為單個或小團塊為宜）。
細胞活性驗證
建議使用臺盼藍染色檢測細胞活力（>90%為合格）。
Q1：消化后細胞聚集成團如何處理？
A：可適當延長消化時間，或增加吹打次數(shù)，但需避免產(chǎn)生過多泡沫。
Q2：培養(yǎng)基出現(xiàn)沉淀是否正常？
A：基礎(chǔ)培養(yǎng)基含血清成分，低溫儲存可能產(chǎn)生少量沉淀，37℃水浴復(fù)溶后不影響使用。
低溫組件（消化液、添加劑）：干冰運輸，收到后立即存于-20℃。
常溫組件（濾網(wǎng)）：避光干燥保存。
開封后建議：清洗液與培養(yǎng)基4℃保存并于1個月內(nèi)用完；消化液與添加劑分裝后-20℃保存，避免反復(fù)凍融。
產(chǎn)品優(yōu)勢
? 專用配方：針對纖維環(huán)細胞特性優(yōu)化，提升分離效率與細胞純度
? 操作便捷：預(yù)配試劑減少實驗準備時間，標準流程降低操作誤差
? 穩(wěn)定可靠：嚴格質(zhì)控確保批次間一致性，支持大規(guī)模實驗需求
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