在普諾賽3月30日開(kāi)播的細(xì)胞培養(yǎng)直播課堂中，有很多同學(xué)提出各種疑問(wèn)。我們篩選出具有代表性的問(wèn)題，并作了詳細(xì)解答。
01 動(dòng)物細(xì)胞怎么鑒定？
要根據(jù)實(shí)驗(yàn)的目的以及細(xì)胞類(lèi)型進(jìn)行選擇。如果是人源細(xì)胞系，并且有文獻(xiàn)或數(shù)據(jù)庫(kù)公布對(duì)應(yīng)細(xì)胞信息，則進(jìn)行STR鑒定即可；如果使非人源的細(xì)胞系，可以進(jìn)行種屬鑒定，并且附加一個(gè)研究方向相關(guān)的指標(biāo)進(jìn)行驗(yàn)證，部分小鼠細(xì)胞也可以做STR鑒定，但目前數(shù)據(jù)庫(kù)不*，很多都沒(méi)有匹配數(shù)據(jù)。對(duì)于原代細(xì)胞，如果能夠確保取材無(wú)誤，僅進(jìn)行特異性指標(biāo)方面的檢測(cè)就可以了，方法可采用免疫熒光、流式檢測(cè)、WB檢測(cè)等。
02 發(fā)表高水平文章時(shí)，需要提供哪些文件呢？COA？STR？
目前*的細(xì)胞鑒定文件為STR鑒定，對(duì)于不適用STR鑒定方法的細(xì)胞，可以根據(jù)自己的研究方向?qū)?xì)胞進(jìn)行驗(yàn)證，方法沒(méi)有限制，一些新的技術(shù)和方法的應(yīng)用能夠一定程度上提高文章的檔次。
03 原代細(xì)胞和細(xì)胞系有啥區(qū)別？
主要是傳代次數(shù)上的差異。原代細(xì)胞一般指從動(dòng)物組織直接提取的細(xì)胞，而細(xì)胞系是在原代培養(yǎng)的基礎(chǔ)上經(jīng)過(guò)傳代和篩選得到。另外常用的細(xì)胞系，都是經(jīng)過(guò)篩選得到的穩(wěn)定細(xì)胞群體，特性在進(jìn)行連續(xù)性實(shí)驗(yàn)時(shí)能夠保證結(jié)果更加穩(wěn)定，而原代細(xì)胞的優(yōu)勢(shì)則在于與機(jī)體細(xì)胞特征更加接近。
04 pc12細(xì)胞高分化后，多次傳代會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果嗎？
PC-12（高分化）細(xì)胞是穩(wěn)定的細(xì)胞系，正常傳代不會(huì)改變細(xì)胞特性，但是傳代過(guò)程中如果出現(xiàn)生長(zhǎng)過(guò)度、污染等異常情況可能會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞發(fā)生變化，所以建議在低代次時(shí)凍存保種。若是自行誘導(dǎo)建系的高分化PC-12細(xì)胞，則要看誘導(dǎo)后得到的細(xì)胞特性是否穩(wěn)定，一般也是建議在細(xì)胞狀態(tài)穩(wěn)定時(shí)凍存，避免后續(xù)長(zhǎng)期傳代培養(yǎng)過(guò)程中出現(xiàn)意外。
05 H22的STR為啥和NIH/3T3的STR基本相似？
首先要明確一點(diǎn)，H22和NIH/3T3兩株細(xì)胞在特性上差異較大，混淆的概率非常小，而STR位點(diǎn)數(shù)據(jù)相似，可能是由于這兩株細(xì)胞本身親緣關(guān)系非常接近。由于很多品種的小鼠都是近交品系，同種小鼠本身親緣關(guān)系就比較近，這就有可能導(dǎo)致不同的小鼠細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)位點(diǎn)接近的情況，這也是目前小鼠STR沒(méi)有廣泛應(yīng)用的原因之一。
06 腫瘤相關(guān)成纖維細(xì)胞也需要自己鑒定吧？
做細(xì)胞鑒定需要先明確鑒定的目的。如果自己提取的腫瘤細(xì)胞或者癌旁的成纖維細(xì)胞，可以用免疫學(xué)的方法去確定得到的細(xì)胞是屬于什么類(lèi)型。
07 ATCC為什么看不到HSC？
HSC細(xì)胞從名稱(chēng)上來(lái)看應(yīng)該是原代提取細(xì)胞的簡(jiǎn)稱(chēng)，或者是簡(jiǎn)寫(xiě)的名稱(chēng)，并沒(méi)有寫(xiě)全。通用的標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞系中，沒(méi)有HSC這株細(xì)胞的信息。另外，ATCC并沒(méi)有收錄所有種類(lèi)的細(xì)胞系，很多國(guó)內(nèi)建系的細(xì)胞也無(wú)法查到，可以參考PPT中講到的查詢(xún)方法，多查幾個(gè)細(xì)胞庫(kù)的資源看看。
（如需PPT視頻，請(qǐng)移步普諾賽，直線聯(lián)系各區(qū)*）
08 細(xì)胞系具有無(wú)限增殖的能力，正常的細(xì)胞培養(yǎng)成細(xì)胞系之后，那不是很多蛋白的表達(dá)都改變了，做蛋白質(zhì)差異表達(dá)分析的不是就不準(zhǔn)了嗎？
細(xì)胞系具有無(wú)限增殖的能力，同時(shí)它的另一個(gè)要求是穩(wěn)定傳代。如果是在培養(yǎng)中或者經(jīng)過(guò)篩選得到另外一種特性的細(xì)胞，則可以定義為一株新的細(xì)胞系；如表達(dá)/不表達(dá)某某蛋白的細(xì)胞，在不經(jīng)過(guò)特殊處理的情況下，傳代過(guò)程中細(xì)胞發(fā)生變異的概率極低。培養(yǎng)條件不改變的情況下，短期內(nèi)不需要擔(dān)心蛋白表達(dá)發(fā)生變化。
09 BGC胃癌細(xì)胞是不是也是污染了？
如果指的是BGC-823細(xì)胞，這株細(xì)胞確實(shí)是建系時(shí)被Hela污染的，相關(guān)信息可以在Expasy網(wǎng)站上查到。
10 在肺泡灌洗液找到了一組細(xì)胞，但是我們想鑒定一下到底是什么細(xì)胞，有什么辦法嗎？
先推斷可能的細(xì)胞種類(lèi)，再根據(jù)這些種類(lèi)選擇對(duì)應(yīng)的指標(biāo)進(jìn)行鑒定。如肺泡灌洗液中最可能出現(xiàn)的就是巨噬細(xì)胞或脫落的上皮細(xì)胞，根據(jù)這些種類(lèi)細(xì)胞的指標(biāo)進(jìn)行鑒定即可。
11 雞細(xì)胞怎么做鑒定？
確定雞的種屬可以用PCR法，設(shè)計(jì)種屬特異性的引物進(jìn)行鑒定；要確定細(xì)胞的類(lèi)型可以用免疫學(xué)的方法，選擇對(duì)應(yīng)的抗體進(jìn)行鑒定。
12 從小鼠原代細(xì)胞系中制備可以傳代的細(xì)胞系怎樣最快？
從原代培養(yǎng)的細(xì)胞建立細(xì)胞系，可以通過(guò)病毒基因轉(zhuǎn)染、端粒酶激活等方法。
13 對(duì)細(xì)胞系進(jìn)行轉(zhuǎn)染質(zhì)粒敲除，敲除后的細(xì)胞系可以繼續(xù)傳代嗎？
有文獻(xiàn)研究表明，即使敲除了永生化過(guò)程中導(dǎo)入的相關(guān)基因后，細(xì)胞不會(huì)停止繼續(xù)增殖的情況，反而在細(xì)胞特異性分化、分泌代謝等方面趨于成熟。也就是說(shuō)，即使敲除了轉(zhuǎn)染的基因，細(xì)胞系也可以繼續(xù)傳代。
4月直播課堂將于4月28日開(kāi)播，記得關(guān)注普諾賽公眾號(hào)哦~
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